Molecular Biology 728x

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Assays


DNAポリメラーゼの活動の計測より

  • Incorporation assay
  • Primer extension assay

複製フォークより

  • ヘリカーゼの活動の計測

ReplicationGenesとその見つけ方より

  • Biochemical Fractionation

複製の開始に関わるassay達より

  • EMSA: Electrophoretic Mobility Shift Assay (Gel Shift Assayとも)。ラベルをつけたDNAにタンパク質をくっつけて電気泳動。重いと動きが遅いので。
  • DNase I Protection assay (footprint assay) 。DNAの片方のstrandの末端にラベルづけし、タンパク質を加えて反応させて、DNase Iを加えてニックを入れて電気泳動(probeからnickまでの長さが検出されるが、タンパク質に守られた所はnickが入らないのでそこだけ空白になる)
  • DNA unwinding assay. ssDNAだけにnickを入れるなにかを使ってfootprintと同じような事をする。KMnO4やssDNA endonucleaseが使われる。
  • Template Association Assay: マグネットビーズをつけたtemplateにタンパク質を結合させてマグネットで釣り上げる。

真核生物の複製の始動より

  • ChIP (Chromatin immunoprecipitation) ヘリカーゼのloadingに関するassay。ヘリカーゼをくっつけて裁断して測る。

Transcription入門より

  • RT-PCR

バクテリアのTranscription入門のTranscriptionのプロモーターのマッピングより

  • Promoter Fusion Assay